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蛋白纯化方法选择

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  • 发布时间:2022-04-29 11:05
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【概要描述】  蛋白质纯化的目的是将目标蛋白从细胞裂解液的所有组分中分离出来,下载同时仍保留蛋白的生物活性和化学完整性。蛋白质的分离纯化是一项艰巨而繁重的任务,因此有必要根据蛋白质的特性选择合适的纯化方法来提高蛋白质产品的纯度。

蛋白纯化方法选择

【概要描述】  蛋白质纯化的目的是将目标蛋白从细胞裂解液的所有组分中分离出来,下载同时仍保留蛋白的生物活性和化学完整性。蛋白质的分离纯化是一项艰巨而繁重的任务,因此有必要根据蛋白质的特性选择合适的纯化方法来提高蛋白质产品的纯度。

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  蛋白质纯化方法选择

  蛋白质纯化的目的是将目标蛋白从细胞裂解液的所有组分中分离出来,下载同时仍保留蛋白的生物活性和化学完整性。蛋白质的分离纯化是一项艰巨而繁重的任务,因此有必要根据蛋白质的特性选择合适的纯化方法来提高蛋白质产品的纯度。

  蛋白质纯化方法

  蛋白质纯化的原理是不同蛋白质的氨基酸序列和空间结构不同,导致物理、化学、生物等性质的差异。利用待分离蛋白质与其他蛋白质的差异,可以设计合理的蛋白质纯化方案。

  蛋白质纯化大致可以分为两个阶段:粗分离阶段和精净化阶段。在粗分离阶段,目的蛋白主要与RNA、DNA等其他细胞成分分离,常用的方法是硫酸铵沉淀法。精纯化阶段的目的是将目标蛋白质与具有相似大小和物理化学性质的其他蛋白质区分开。常用的方法有凝胶过滤色谱法、离子交换色谱法等。

  凝胶过滤色谱法

  凝胶过滤(也称为排阻色谱或分子筛)是一种根据分子大小从混合物中分离蛋白质的方法。不同蛋白质的形状和分子大小不同。当混合物通过装有填充颗粒的凝胶过滤层析柱时,由于各种蛋白质的分子大小不同,扩散成特定孔径颗粒的能力也不同。蛋白质分子越大的先洗脱,分子越小的越晚洗脱,从而达到蛋白质分离的目的。一般来说,凝胶过滤柱越细越长,净化效果越好。

  凝胶层析纯化的蛋白质分子量范围很宽,纯化过程中不需要会引起蛋白质变性的有机溶剂。缺点是使用的树脂略亲水,电荷密度较高的蛋白质容易吸附在上面,不适合纯化电荷密度较高的蛋白质。

  离子交换层析

  离子交换层析是根据蛋白质表面电荷的不同进行蛋白质分离纯化的技术。蛋白质表面通常带有一定的电荷,带电荷的氨基酸残基均匀分布在蛋白质表面,在一定条件下可以与阳离子交换柱或阴离子交换柱结合。带电分子和固定相之间的结合作用是可逆的。当改变pH或用离子强度逐渐增加的缓冲溶液洗脱时,结合在离子交换剂上的物质可与洗脱液中的离子交换并被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同,其与离子交换剂的结合能力也不同,因此洗脱到溶液中的顺序也不同,从而达到分离的效果。离子交换色谱的基本原理和实验操作。


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