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蛋白质纯化的注意事项

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  • 发布时间:2022-06-13 10:26
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【概要描述】  蛋白质纯化的分离纯化在生化研究和应用中有着广泛的应用,是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质,其中一些非常丰富,一些仅包含几个拷贝。为了研究一种蛋白质,我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。

蛋白质纯化的注意事项

【概要描述】  蛋白质纯化的分离纯化在生化研究和应用中有着广泛的应用,是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质,其中一些非常丰富,一些仅包含几个拷贝。为了研究一种蛋白质,我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。

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  蛋白质纯化的分离纯化在生化研究和应用中有着广泛的应用,是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质,其中一些非常丰富,一些仅包含几个拷贝。为了研究一种蛋白质,我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。

  蛋白质纯化要利用不同蛋白质之间固有的相似性和差异性,利用各种蛋白质之间的相似性去除非蛋白质物质的污染,利用蛋白质的差异性从其他蛋白质中提纯目标蛋白质。每种蛋白质的大小、形状、电荷、疏水性、溶解性、生物活性都会不同。利用这些差异,可以从混合物如大肠杆菌裂解物中提取蛋白质以获得重组蛋白质。

  蛋白质纯化预防措施

  进行任何一种蛋白质纯化时,都要时刻注意保持其稳定性,保护其活性。需要记住一些一般预防措施,包括:

  1.操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。

  2.不要太稀,蛋白浓度维持在μg/mL~mg/mL。

  3.适当的pH,除非进行聚焦层析,否则所用缓冲溶液的pH应与pI相同,以防止蛋白质沉淀。

  4.使用蛋白酶抑制剂防止蛋白酶降解目标蛋白;在细胞内纯化蛋白质时,加入DNA酶,降解DNA,防止DNA污染蛋白质。

  5.避免反复冷冻和搅拌样品,以防止蛋白质变性。

  6.缓冲溶液的组成尽可能模拟细胞内环境。

  7.在缓冲溶液中加入0.1~1mmol/LDTT(二硫苏糖醇)(或β-巯基乙醇)以防止蛋白质氧化。

  8.加入1~10mmol/LEDTA金属螯合剂,防止重金属对目的蛋白的损伤。

  9.使用灭菌溶液防止微生物生长。


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